病理检查基本过程

研究内容

通过全自动高通量的组织切片和组织芯片制备结合HE、IHC、IF、多色免疫荧光染色分析和HALO人工智能数据分析系统；进行原位病理诊断分析、非临床安全性研究和原位组织微环境biomarker研究；开展不同种属、不同疾病模型的组织病理学分析。

诊断性病理分析：动物模型—哮喘/AD/银屑病/IBD/CIA/EAE/PDX/免疫重建

药效评价相关病理分析：评分方法—定性分析&半定量分析：Image J; HALO

毒性评价相关病理分析：病理评价要点：病变性质和程度；是否有药物相关的脏器改变；剂量相关性。

临床医学转化中心：

肿瘤诊断/病理报告书写

诊断：HE染色、IHC染色（结合其他检测结果）

报告：病例信息、病史、镜下所见、照片、诊断结果等

检测方法

常规H&E染色（Hematoxylin-Eosin staining）

普通染色/常规染色/HE染色。最常用的一种方法，适用于石蜡和冰冻切片。通过它或者结合其他辅助方法，可以做出准确完整的病理诊断。细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。

哮喘模型：炎细胞/嗜酸性粒细胞浸润

HE诊断

特殊病理染色(举例)

IHC方法检测

免疫荧光检测IF 

TUNEL染色(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)：石蜡切片&冰冻切片。

生物素biotinylate标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶的链霉亲和素streptavidin特异性结合，后者又与POD底物H₂O₂、DAB产生深棕色反应，特异准确地定位正在凋亡的细胞，即可在光学显微镜下观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3’-OH形成，很少能够被染色。是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。

甲苯胺蓝染色原理（建议石蜡切片）：

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测。

Masson染色原理（建议石蜡切片）：

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关，分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。然而，淡绿或苯胺蓝的分子量都很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

PAS染色（Periodic Acid-Schiff stain）原理（建议石蜡切片）：

PAS 染液在组织学上，主要用来检测组织中的糖原或其他多糖物质。PAS阳性为红色。

LFB染色(Luxol Fast Blue stain) 原理：建议石蜡切片

劳克坚牢蓝(Luxol Fast Blue, LFB)属于铜－酞箐染料，在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。

一般染脑、脊髓、外周神经。神经髓鞘呈亮蓝色，背景无色至浅蓝色，主要用来显示神经髓鞘的形态结构及病理变化。

RNAscope

是一种新颖的RNA ISH技术，具有独特的探针设计策略，允许同时进行信号放大和弱化背景，从而在保持组织形态的同时实现RNA单分子可视化。

实验原理：首先组织切片（FFPE）经过适当的预处理，然后使用ACD专利的特异性寡核苷酸探针与靶标RNA 进行杂交。RNAscope® 2.5 HD 可见光双染检测采用两种独立的信号放大系统，每个信号放大系统均采用不同的酶与底物的反应进行显色。两个靶基因的 RNA 转录本显示为两个不同颜色的点状或信号簇状， 在明场显微镜 40- 100 倍放大下可见探针与靶标RNA杂交，再经信号放大，再显色的过程。弥补IHC检测的不足，可用于检测易降解、分泌型的蛋白。

组织芯片TMA

组织微阵列(tissue microarrays)，也称组织芯片(tissue chip)，是将数十个、数百个甚至上千个小组织整齐的排列在某一载体上。

优势：

高通量，一次获得大量信息，大幅度提高效率；

实验条件保持一致，减少实验误差；

大量缩减研究费用；

可比性强，准确性高；

有利于原始蜡块的保存；

便于设置各种实验对照；

临床前毒理学研究的主要内容是药物的安全性评价，药物是否安全和有效是药物研发成功与否的决定因素，在药物研发的整个流程来说，毒性（安全性）是终止药物研发的重要原因之一。其目的是通过研究在动物模型上药物暴露量与毒性反应的关系，解释可能的毒性靶器官和毒性反应，预测人体安全性，为后期（人体）临床试验用药提供可靠的毒代动力学依据。

组织病理分析

炎症因子/细胞因子风暴检测

炎症是免疫反应的一部分，在机体抵御病毒、细菌、真菌和其他寄生虫等病原体上起重要作用。但是，炎症过程激活不当是许多常见病理状况的根本原因。例如，当免疫系统将我们的细胞或组织误认为是病原体并对其进行攻击时，就会导致自身免疫性疾病。此外，研究表明，当炎性细胞因子产生的微环境有利于癌症恶化时，可能导致肿瘤增殖和转移。

炎症反应的整体影响取决于促炎介质和抗炎介质之间的平衡。促炎性细胞因子（例如 IL-1 β、IL-6 和 TNF α）可促使发生早期炎症反应，并可放大炎症反应；而抗炎性细胞因子（包括 IL-4、IL-10 和 IL-13）作用相反，因为其可抑制炎症反应。促炎和抗炎性细胞因子和趋化因子网络日益复杂，因此有必要在相关功能组织中对其进行全面检测，而非仅仅检测单个因子。

所谓的细胞因子风暴或细胞因子释放综合征（CRS）的特征为促炎反应激进与抗炎反应不足，从而导致免疫反应稳态失衡。细胞因子风暴病理学研究中确定的关键指标包括 TNF α、干扰素、IL-1β、MCP-1（CCL2），最重要的是 IL-6。

ELISA

实验原理：抗原抗体结合形成固相免疫复合物，通过加入的酶标抗体和底物显色反应的程度进行抗原/抗体的定性或定量分析。

实验方法：

双抗体夹心法（检测抗原的常用方法）：固相载体上包被特异性抗体，检测受检样品中的抗原。

细胞因子微球检测技术（Cytometric Bead Array, CBA）

细胞因子微球检测技术（Cytometric Bead Array，CBA），是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,该技术整合了免疫微球、激光检测、信号处理及计算机运算等功能，能够对样本中的多个指标进行定性、定量检测。相较于ELISA，检测样本需求更少，更有效的捕获被分析物，检测更快速、准确。

Luminex多功能流式点阵仪平台

       基于Luminex®平台的xMAP技术，以更少量的样本完成对更多生物标志物的分析。能检测细胞因子、趋化因子、生长因子、代谢和内分泌相关指标、神经科学类、抗体亚型鉴别、肿瘤和信号通路相关分子等。可以实现同时对多达500种因子进行检测与定量。该技术在多通道“类ELISA”分析中，为每种靶标使用了经不同染色处理的捕获微球。相比传统的液相样本中相应指标的定量检测技术（如传统ELISA），该技术的最大优势为可实现同时在单个样本中定量、定性检测多达几十、上百种指标分子。

血液学检测

血常规

血常规是指通过观察血细胞的数量变化及形态分布从而判断血液状况及疾病的检查，随着检验现代化、自动化的发展，现在的血常规检验是由机器检测完成的。血常规检查包括有红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、白细胞（WBC）、白细胞分类计数及血小板（PLT）等，通常可分为三大系统，即红细胞系统、白细胞系统和血小板系统。

可检测指标：

血生化

血液是充满于人体血管中的一种鲜红色的液体，在血液中除了含有血液细胞外，还有许多不同的物质。检测存在于血液中的各种离子、糖类、脂类、蛋白质以及各种酶、激素和机体的多种代谢产物的含量，叫做血生化检查。可以提供诊断与治疗依据，并能帮助临床确定病情、监测治疗效果。

可检测指标：

案例：Urelumab对B-h4-1BB小鼠的毒性评价

4-1BB人源化鼠中，20 mg/kg的高剂量Urelumab analogue连续4次给药后，发现在21天，出现血清转氨酶ALT的升高。